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光學技術如何提高顯微鏡分辨率?

[2024/6/25]

光學技術的進步是提高顯微鏡分辨率的關鍵,這些技術使得科學家和研究人員能夠觀察到更細微的結構和現象。以下是一些提升顯微鏡分辨率的光學技術方法:

  1. 相差顯微鏡:利用光的相位差來增強樣本對比度,尤其適合觀察無色透明樣本。相位板會引入輕微的相位延遲,使得不同密度區域的光波相遇時產生可檢測的明暗差異,從而提高細節分辨能力。

  2. 共聚焦激光掃描顯微鏡:通過聚焦一束激光點到樣本上,并僅收集來自焦點處的熒光或反射光,排除了非焦點平面的散射光,減少了背景噪聲,顯著提高了軸向分辨率。此外,通過逐點掃描并重建三維圖像,可以得到高清晰度的細胞內部結構圖像。

  3. 全內反射熒光顯微鏡(TIRF):利用全內反射現象,在樣本與覆蓋介質的界面附近形成一個非常薄的激發光層,只激發緊鄰界面的熒光分子,極大地減少了背景熒光,非常適合觀察貼附在基底上的細胞膜及其附近的動態過程。

  4. 超分辨顯微鏡

    • STED顯微鏡(受激發射損耗顯微鏡):通過在激發光周圍施加一個環形的抑制光,精確地去激發那些不在焦點中心的熒光分子,僅留下中心區域的熒光信號,從而突破了傳統光學分辨率的限制。
    • PALM/STORM(光激活定位顯微鏡/隨機光學重構顯微鏡):基于單分子定位原理,通過控制熒光分子在時間上分離,逐一記錄并重建單個分子的位置,實現遠高于衍射極限的分辨率。
  5. 結構光照明顯微鏡:通過在樣本上投射特定模式的光(如條紋或網格),采集多幅圖像,并利用數學算法分析這些圖案的變形,重建出高分辨率的樣本圖像。

  6. 干涉技術:如數字全息顯微鏡,利用光的干涉原理記錄樣本的光波前信息,通過數字處理重建出具有高分辨率的樣本圖像,特別適合非破壞性測量和動態過程的觀察。



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